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簡介

實驗

通過這項工作，我們開始測試Flash快速制備色譜是否對純化多種肽有任何優勢。所以，我們選擇肽樣品的大小范圍從幾個氨基酸到長度為32個氨基酸。為了測試裝載能力的優勢，我們在 12g FlashPure C18、60?， 40μm 柱子中裝載了 30mg–1g 多肽抗生素（多粘菌素B硫酸鹽）。

接下來，我們測試了 Pure 快速純化的能力，以充分混合在分離肽和小氨基酸（牛磺酸（35mg）+萬古霉素（45mg）+多粘菌素（56mg）。

樣品：

多肽，氨基酸和多肽抗生素（Sigma Aldrich）

合成肽混合物（California Peptide Research, Inc）

設備：

Pure 分離純化系統（BUCHI）

耗材：

Flash Pure C18（BUCHI）

結果與討論

評估60?，40μm C18色譜柱的載樣能力

為了測試載樣能力，將 30mg–1g 的多粘菌素B硫酸鹽裝入12g FlashPure C18 中，通常來講 HPLC 的典型制備上樣量為柱子填料量的 0.1- 1.0％。而快速純化載樣數據表明，可加載 0.1–10％ 的樣品而不會對色譜柱產生不利影響。這意味著與通常需要多次進樣的單獨制備型HPLC相比，使用快速純化可以在一次進樣中處理更大量的粗肽。與此同時，可以使用更少的溶劑和更少的時間來純化大量的樣品。Pure 純化系統的另一個優勢是能夠使用干法上樣方式為低溶解度樣品提供更高的負載量。

評估多肽混合物的分離

包含兩個多肽（萬古霉素和硫酸多粘菌素B）和一個小氨基酸（牛磺酸）的測試混合物證明了 Pure 快速純化系統能夠充分分離肽混合物的能力。結果表明，使用 60?，40μm C18 介質進行快速純化可充分分離出三種具有對稱峰形的化合物。UHPLC證實了萬古霉素和硫酸多粘菌素B的純度均高于 98％。混合物在10分鐘內純化，這比使用制備型 HPLC 純化相同混合物快約4倍。除此之外，結合了 UV 和 ELSD 雙檢測器系統的另一個好處是，可以檢測和收集未反應的氨基酸片段和無紫外吸收產物。以此為例，牛磺酸僅被 ELSD 檢測到。

結論

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