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本文隸屬于微射流均質機應用專題,全文共3800 字,閱讀大約需要 20 分鐘
摘要
本研究系統比較了微射流均質、超聲波和轉子-定子三種制備技術對高油酸棕櫚油(HOPO)納米脂質體物理穩定性的影響。結果表明,微射流均質技術制備的納米脂質體具有最優的物理穩定性,其平均粒徑最小(100.3±1.7 nm),多分散指數最低(0.13±0.01);超聲波技術制備的樣品則表現出最佳的膠體穩定性(Zeta電位-55.9±0.8 mV)。研究還發現HOPO的加入顯著提高了納米脂質體的儲存穩定性,在4℃條件下儲存35天后,含HOPO樣品的粒徑增長幅度較對照組降低40%。本研究為食品工業中功能性油脂的高效遞送提供了重要的技術參考
關鍵詞:
納米脂質體;微射流均質;高油酸棕櫚油;物理穩定性;Zeta電位;粒徑分布;響應面優化食品遞送系統
二、整體框架
本篇文章的整體框架如下所示:
三、引言
高油酸棕櫚油(HOPO)作為一種富含生物活性成分的功能性油脂,其高含量的β-胡蘿卜素(可達500-700 mg/kg)和維生素E等天然抗氧化劑,不僅具有重要的營養功能,更能通過與磷脂分子的協同作用增強脂質體膜的穩定性。
當前納米脂質體的主要制備技術包括微射流均質、超聲波處理和轉子-定子分散等。其中,微射流均質技術憑借其高效的粒徑控制能力和良好的工藝重復性,在工業化生產中展現出獨特優勢;超聲波技術則以設備簡單、成本低廉見長;而轉子-定子技術則在處理高黏度體系時具有明顯優勢。然而,這三種技術在能耗效率、產品穩定性和活性成分保護等方面的比較研究仍顯不足。
基于此,本研究采用響應面法系統優化制備工藝參數,重點考察微射流均質、超聲波和轉子-定子三種技術對HOPO納米脂質體物理穩定性的影響規律。通過表征粒徑分布、Zeta電位和多分散性指數等關鍵指標,結合儲存穩定性實驗,建立工藝-結構-性能的構效關系,為功能性油脂納米載體的工業化應用提供理論依據和技術支持。
四、基本流程
粗脂質體制備
原料混合
將大豆卵磷脂(含16%磷脂酰膽堿、14%磷脂酰乙醇胺、10%磷脂酰肌醇、34%甘油三酯)與高油酸棕櫚油(HOPO)按實驗設計比例混合。
水合過程
溫度控制:35℃恒溫攪拌(1000 rpm,10 min)
水相添加:緩慢加入Milli-Q純水
初級均質:高速均質器(Ultra-Turrax T25,20,000 rpm,12 min)
產物特征:形成多層囊泡(MLV),粒徑范圍1-5 μm
微射流均質處理
將粗脂質體樣品在微射流均質機中以 75 μm Z 型交互腔進行處理;通過改變壓力(500–1500 bar)與循環次數(2–6 次)來調控粒徑。整個過程中使用冰水浴將懸浮液溫度控制在 < 35 °C。
超聲處理
取 80 mL 粗脂質體懸浮液置于 100 mL 燒杯中,使用 超聲波(1/2″探頭,20 kHz)按表 2 設計的“時間 (min)”與“振幅 (%)”進行超聲處理;冰水浴控溫 < 35 °C。
轉子-定子處理
將粗脂質體懸浮液連續循環通過轉子-定子系統,按表 2 的設計調節轉速(15000–25000 rpm)與處理時間(0.5–4 min);2 °C 水循環系統控溫 < 35 °C。
五、結果與討論
1、均質技術對納米脂質體特性的影響
三種技術均能制備出粒徑 ≤ 200 nm 的納米脂質體。
微射流(MF) 得到的粒徑最小且分布最集中(最低 100.3 nm,PdI = 0.13),可通過調節壓力與循環次數精準控制。
超聲(US) 可將粒徑降至 149.2 nm,但 PdI 稍高(0.20),主要受超聲時間和振幅影響。
轉子-定子(RS) 所得粒徑最大,最小為 163.6 nm,PdI 可達 0.25,受轉速與處理時間主導。
Zeta 電位穩定性:US(?55.9 mV)> RS(?51.6 mV)> MF(?46.6 mV)。
對所有技術建立 RSM 模型并進行方差分析(ANOVA)。僅保留 p < 0.05 的顯著模型;所有模型的 R2 均 > 0.90,且失擬項 p > 0.05,表明模型擬合良好、可用于預測。
微射流均質對納米脂質體穩定性的影響
粒徑:隨壓力和循環次數的增加而顯著減小;最高壓力(1500 bar)+ 6 次循環可得到 100.3 nm。油濃度升高會增大粒徑(長鏈油酸插入磷脂雙層),而卵磷脂濃度升高則使粒徑減小(形成更多囊泡)。
Zeta 電位:范圍為 ?32.1 ~ ?46.6 mV,處于高穩定區間。壓力與循環次數的增加會削弱電位,可能因氧化或空氣混入。提高油濃度可維持更負的電位,推測與其抗氧化成分協同卵磷脂有關。
PdI:0.13–0.28,均 < 0.3,表明體系高度均一;循環次數增加可明顯降低 PdI。
超聲波對納米脂質體穩定性的影響
粒徑:隨超聲時間延長和振幅增大而減小;10 min、100 % 振幅下可獲得 149.2 nm。油濃度升高同樣增大粒徑。
Zeta 電位:整體在 ?32.4 ~ ?55.9 mV 之間,處于高穩定區。長時間超聲使電位絕對值減小,可能與空化產生的自由基促進磷脂水解/氧化有關。
PdI:隨超聲時間和振幅增加而降低;更長的處理時間和更高振幅帶來的強空化作用有助于粒徑均勻化。
轉子-定子因子對納米脂質體穩定性的影響
粒徑:隨轉速和處理時間增加而減小;最高轉速(25000 rpm)+ 4 min 可將粒徑降至 163.6 nm。油濃度和卵磷脂濃度對粒徑的影響趨勢與上述兩種技術一致。
Zeta 電位:范圍 ?27.3 ~ ?51.6 mV,整體仍屬高穩定。
PdI:0.25–0.56,明顯高于前兩種技術,說明粒徑分布較寬;提高轉速和時間可在一定程度上改善均一性。
納米脂質體的優化及貯藏物理穩定性
通過 RSM 分別對三種技術進行二次優化:
以粒徑、Zeta 電位絕對值和 PdI 最小化為目標;
在此基礎上,進一步最大化 HOPO 載量以考察其對穩定性的影響。
將所得最優配方于 4 °C 貯藏 35 d,每 7 d 取樣測定粒徑、Zeta 電位及 PdI(表 6)。
粒徑變化:
MF 與 US 制備的樣品在整個貯藏期內粒徑均 < 200 nm。
高油載量 US 樣品的粒徑增幅最小(僅 2.7 %),而 RS 高油樣品增幅最大(15.2 %)。
Zeta 電位變化:
高油載量 MF 樣品電位絕對值下降較大(18.9 %);US 與 RS 樣品下降幅度更小(≤ 26 %),表明高油濃度可在一定程度上提高電位穩定性。
PdI 變化:
MF 與 US 樣品的 PdI 仍 < 0.3,保持高度均一;RS 樣品在高油載量時 PdI 升至 0.35,分布趨于不均。
透射電鏡(TEM)觀察
最優條件下制備的納米脂質體呈球形單層囊泡結構,粒徑與 DLS 結果一致,進一步驗證三種技術均可獲得納米級脂質體
MicrographinTEM:A.Microfluidization,B.Ultrasound,C.Rotor-Statorall theimagespresentsphericalgeometrieswiththepresenceofmonolayer lipo somes.
MF 與 US 最優脂質體中 β-胡蘿卜素的含量
β-胡蘿卜素易受熱降解。
HPLC 結果顯示: 粗脂質體懸浮液中 β-胡蘿卜素含量為 6.49 × 10?3 mg mL?1。 經微射流處理后保留率 92.9 %(下降 7.09 %); 經超聲處理后保留率 61.2 %(下降 38.83 %)。
表明微射流技術對 β-胡蘿卜素的破壞最小,可能與超聲局部瞬時高溫有關。
六、結論
采用響應面法(RSM)對三種均質技術——微射流(MF)、超聲(US)和轉子-定子(RS)——在包埋高油酸棕櫚油(HOPO)納米脂質體制備中的工藝與配方進行了系統優化。
微射流技術 在所考察范圍內綜合表現最優,可獲得最小粒徑(≈ 100 nm)和最低多分散指數(PdI < 0.15),體系均一性最好。
三種技術均能制備粒徑 < 200 nm 的納米脂質體,均符合“納米脂質體”定義。
通過優化 HOPO 載量發現,提高油含量可顯著提升脂質體在 4 °C、35 d 貯藏過程中的物理穩定性:
微射流與超聲條件下,高油樣品的粒徑增長、Zeta 電位絕對值下降及 PdI 增幅均低于低油樣品。
結果表明HOPO 中的抗氧化成分(如 β-胡蘿卜素)與磷脂雙分子層存在協同抗氧化作用,從而延緩脂質體聚集與氧化降解。
微射流均質處理整體解決方案
參考文獻
[1]Juan David Beltrán, Ricaurte L , Estrada K B ,et al.Effect of homogenization methods on the physical stability of nutrition grade nanoliposomes used for encapsulating high oleic palm oil[J].LWT, 118[2025-08-09].DOI:10.1016/j.lwt.2019.108801.
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